Бореліоз, Borrelia, антитіла IgG – підтверджуючий тест (імуноблот)

Бореліоз або хвороба Лайма (за назвою міста, де в 1975 р. було виявлено) – поширена інфекція, основним господарем і переносником якої є іксодові кліщі. Збудник – спірохета Borrelia burgdorferi, єдина патогенна для людини. Господарями є багато хребетні тварини: собаки, вівці, птахи, корови та коні. Захворювання характеризується ураженням серця і неврологічної «тріадою»: асептичний менінгіт, параліч лицьового нерва і периферичні невропатії. Через 6 тижнів, а іноді через кілька років у нелікованих пацієнтів розвиваються тяжкі ураження суглобів. Всі знані геновиди В. утворюють комплекс B.burgdorferi sensu lato, представники якого нерівномірно розподілені в межах нозоареалу ХЛ. Патогенність для людини доведена для B.burgdorferi sensu stricto, B.afzelii та B.garinii.
Антитіла класу IgG до Borrelia burgdorferi можуть виявлятися на 1 – 3 тижні після інфікування, услід за антитілами класу IgM, пік IgG – через 1,5 – 3 місяці. Антитіла до Borrelia burgdorferi часто не виявляються на ранній стадії захворювання або при рано призначенії антимікробнії терапії. Негативний результат серологічних досліджень на ранніх стадіях інфекції не є підтвердженням її відсутності і вимагає повторної перевірки в динаміці через 2 – 4 тижні. Антитіла класу IgG циркулюють в крові тривалий термін (від кількох місяців до кількох років), навіть після успішної антимікробної терапії і лікування інфекції. Імунітет проти Borrelia burgdorferi не є стерильним. Специфічність ІФА дослідження антитіл до Borrelia burgdorferi в даний час досягає 95%, тому що неспецифічні реакції, перехресне реагування з антигенами інших бактерій можуть приблизно в 5% випадків давати хибнопозитивні результати.
У сумнівних випадках для підтвердження результатів ІФА-досліджень використовують імуноблот. Дозволяє визначити структурні та неструктурні білки мікроорганізму, підвищує специфічність до 88%. Проводять на 2-4 тижні.

Імуноблот – що це таке? Імуноблот у діагностиці інфекційних захворювань. Імунний блот позитивний Імунний блот позитивний

Своєчасна діагностика ВІЛ-інфекції стає вкрай важливим заходом, тому що раніше початок лікування може багато в чому зумовити подальший розвиток захворювання та продовжити життя хворого. В останні роки спостерігається вагомий прогрес у галузі виявлення цієї страшної хвороби: на зміну старим тест-системам приходять досконаліші, методи обстеження стають доступнішими, і їхня точність значно підвищується.

У цій статті розповімо про сучасні методи діагностики ВІЛ-інфекції, знати які корисно для своєчасного лікування цієї проблеми та підтримання нормальної якості життя хворого.

Методики діагностики ВІЛ

У України для діагностики ВІЛ-інфекції проводиться стандартна процедура , що включає два рівні:

Також для діагностики можуть застосовуватись інші методики:

ІФА тест-системи

На першому етапі діагностики для виявлення ВІЛ-інфекції застосовується скринінговий тест (ІФА), який заснований на створених у лабораторіях білках ВІЛ, що вловлюють специфічні антитіла, що виробляються в організмі у відповідь на інфікування. Після їхньої взаємодії з реагентами (ферментами) тест-системи змінюється забарвлення індикатора. Далі ці зміни кольору обробляються на спеціальній апаратурі, яка визначає результат виконаного аналізу.

Такі ІФА-тести здатні показувати результат уже за кілька тижнів після впровадження ВІЛ-інфекції. Цей аналіз визначає не наявність вірусу, а виявляє вироблення антитіл щодо нього. Іноді, в організмі людини вироблення антитіл до ВІЛ починається через 2 тижні поле зараження, але у більшості людей вони виробляються на більш пізніх термінах , через 3-6 тижнів.

Існує чотири покоління ІФА-тестів із різною чутливістю. В останні роки частіше застосовуються тест-системи III і IV покоління, які створені на основі синтетичних пептидів або рекомбінантних білків і мають більшу специфічність і точність. Вони можуть використовуватися для діагностики ВІЛ-інфекції, моніторингу поширеності ВІЛ та забезпечення безпеки під час перевірки донорської крові. Точність ІФА-тест-систем III та IV покоління становить 93-99% (більш чутливі тести, що випускаються у країнах західної Європи – 99%).

Для виконання ІФА тесту проводиться забір 5 мл крові з вени пацієнта. Між останнім прийомом їжі та аналізом має пройти не менше 8 годин (як правило, він виконується вранці натще). Такий тест рекомендується здавати не раніше ніж через 3 тижні після передбачуваного зараження (наприклад, після незахищеного статевого акту з новим статевим партнером).

Результати ІФА-тесту отримують через 2-10 днів:

• негативний результат: вказує на відсутність інфікування ВІЛ та не вимагає звернення до фахівця;
• помилково-негативний результат: може спостерігатися на ранніх термінах інфікування (до 3 тижнів), при пізніх стадіях СНІДу при вираженому придушенні імунітету та при неправильно проведеній підготовці крові;
• хибнопозитивний результат: може спостерігатися при деяких захворюваннях та при неправильно проведеній підготовці крові;
• позитивний результат: вказує на зараження ВІЛ інфекцією , вимагає проведення ІБ та звернення пацієнта до спеціаліста до центру СНІДу.

Чому ІФА-тест може давати хибнопозитивні результати?

Неправдиві результати ІФА-тесту на ВІЛ можуть спостерігатися при неправильній обробці крові або у хворих з такими станами та захворюваннями:

• множинна мієлома;
• інфекційні захворювання, спровоковані вірусом Епштейна Барр;
• стан після;
• аутоімунні захворювання;
• на фоні вагітності;
• стан після вакцинації.

При вищеописаних причинах у крові можуть бути неспецифічні перехресно реагуючі антитіла, вироблення яких було спровоковано не ВІЛ-інфекцією.

В останні роки частота хибнопозитивних результатів суттєво знизилася завдяки застосуванню тест-систем III та IV покоління, які містять більш чутливі пептидні та рекомбінантні білки (вони синтезуються за допомогою генної інженерії in vitro). Після початку застосування таких ІФА-тестів частота неправдивих результатів значно знизилася і становить близько 0,02-0,5%.

Виявлення хибнопозитивного результату не означає, що людина інфікована ВІЛ. У таких випадках ВООЗ рекомендує провести ще один ІФА-тест (обов’язково IV покоління).

Кров пацієнта відправляється в референс або арбітражну лабораторію з позначкою «повторити» та досліджується на ІФА тест-системі IV покоління. Якщо результат нового аналізу негативний, то перший результат визнається помилковим (хибнопозитивним) та ІБ не проводиться. При позитивному чи сумнівному результаті під час другого тесту хворому обов’язково призначається проведення ІХ через 4-6 тижнів для підтвердження чи спростування ВІЛ-інфікування.

Імунний блот

Остаточний діагноз інфікування ВІЛ може встановлюватися лише після отримання позитивного результату імунного блотингу (ІХ). Для його проведення застосовується нітроцелюлозна смужка, яку нанесені вірусні білки.

Забір крові для ІБ виконується з вени. Далі вона піддається спеціальної обробці і білки, що містяться в її сироватці, поділяють у спеціальному гелі за їх зарядом і молекулярною масою (маніпуляція проводиться на спеціальній апаратурі під впливом електричного поля). На гель із сироватки крові накладають нітроцелюлозну смужку і проводять блот («промокування») у спеціальній камері. Смужка обробляється і якщо в матеріалах є антитіла до ВІЛ, то вони зв’язуються з антигенними смугами на ІБ і виявляються у вигляді ліній.

ІБ вважається позитивним якщо:

• за критеріями American CDC – на смужці є дві або три лінії gp41, p24, gp120/gp160;
• за критеріями American FDA – на смужці є дві лінії р24, р31 та лінія gр41 або gр120/gр160.

У 99,9% випадків позитивний результат ІХ вказує на ВІЛ-інфікування.

За відсутності ліній – ІБ негативним.

При виявленні ліній з gр160, gр120 і gр41 ІБ є сумнівним. Такий результат може виявлятися при:

У разі рекомендується виконання повторного дослідження з допомогою набору інший фірми. Якщо ж після додаткового ІБ результат залишається сумнівним, необхідно спостереження протягом півроку (через кожні 3 місяці проводяться ІБ).

Полімеразна ланцюгова реакція

Тест на ПЛР може визначати РНК вірусу. Його чутливість досить висока і дозволяє виявляти ВІЛ-інфікування вже через 10 днів після зараження. У деяких випадках ПЛР може давати хибнопозитивні результати, тому що його висока чутливість може реагувати і на антитіла до інших інфекцій.

Дана методика діагностики є дорогою, потребує спеціального обладнання та високої кваліфікації спеціалістів. Ці причини не дозволяють проводити її при масовому тестуванні населення.

ПЛР застосовується у таких випадках:

• для виявлення ВІЛ у новонароджених, які народилися від ВІЛ-інфікованих матерів;
• для виявлення ВІЛ у «періоді вікна» або за сумнівного ІБ;
• контролю концентрації ВІЛ у крові;
• для дослідження донорської крові

Тільки за тестом ПЛР діагноз ВІЛ не ставиться, а проводиться як додатковий метод діагностики для вирішення спірних ситуацій.

Експрес-методи

Однією з інновацій у діагностиці ВІЛ стали експрес-тести, результати яких можуть оцінюватися вже за 10-15 хвилин. Найбільш ефективні та точні результати виходять за допомогою імунохроматографічних тестів, заснованих на принципі капілярного потоку. Вони є спеціальні смужки, на які наноситься кров або інші досліджувані рідини (слина, сеча). За наявності антитіл до ВІЛ через 10-15 хвилин на тесті з’являються кольорова та контрольна смужка – позитивний результат. При негативному результаті з’являється лише контрольна смужка.

Як і після тестів ІФА, результати експрес-тестів мають підтверджуватись аналізом ІБ. Тільки після цього може встановлюватися діагноз про ВІЛ-інфікування.

Існують експрес-набори для домашнього тестування. Тест OraSure Technologies1 (США) схвалений FDA, продається без рецепта та може застосовуватись для виявлення ВІЛ. Після проведення тесту, у разі позитивного результату, хворому рекомендується пройти обстеження у спеціалізованому центрі для підтвердження діагнозу.

Інші тести для домашнього використання ще не були схвалені FDA і їхній результат може бути дуже сумнівним.

Незважаючи на те, що експрес-тести за своєю точністю поступаються ІФА-тестам IV покоління, вони широко застосовуються для додаткового тестування населення.

Здати аналізи на виявлення ВІЛ-інфекції можна в будь-якій поліклініці, ЦРЛ або спеціалізованих СНІД-центрах. На території України вони проводяться абсолютно конфіденційно або анонімно. Кожен пацієнт може розраховувати отримання медичної чи психологічної консультації до чи після проведення аналізу. Платити за тести на ВІЛ доведеться лише у комерційних лікувальних закладах , а у державних поліклініках та лікарнях вони виконуються безкоштовно.

Про те, якими шляхами можна заразитися ВІЛ-інфекцією та які міфи існують про можливості заразитися, читайте у

ІМУНОБЛОТ
(western blot) – метод лабораторного дослідження сироватки крові на наявність антитіл до ВІЛ; це більш точний аналіз , ніж ІФА, і використовується для підтвердження результатів ІФА. ІФА – імуноферментний аналіз (ELISA) -лабораторне дослідження , що дозволяє визначити присутність у крові ВІЛ-антитіл; тест на ВІЛ-антитіла.

За рекомендацією ВООЗ імуноблотинг (вестерн-блот) використовується при діагностиці ВІЛ-інфекції як додатковий експертний метод, який повинен підтверджувати результати ІФА. Зазвичай цим методом перевіряють ще раз позитивний результат при ІФА, оскільки він вважається більш чутливим і специфічним, хоча більш складним і дорогим.

Імунний блоттінг поєднує в собі імуноферментний аналіз (ІФА) з попереднім електрофоретичним поділом білків вірусу в гелі та їх перенесенням на нітроцелюлозну мембрану. Процедура імуноблоту складається із кількох стадій (). Спочатку попередньо очищений і зруйнований до складових компонентів ВІЛ піддається електрофорезу, при цьому всі антигени, що входять до складу вірусу, розділяються за молекулярною вагою. Потім методом блотінгу антигени переносять з гелю на смужку нітроцелюлози або нейлонового фільтра, які відтепер містять невидимий поки що оком спектр білків, характерний для ВІЛ. Далі на стрип наноситься досліджуваний матеріал (сироватка, плазма крові пацієнта тощо), і якщо в пробі є специфічні антитіла, то вони зв’язуються зі строго відповідними смужками білків-антигенів. В результаті наступних маніпуляцій (подібних до ІФА) результат цієї взаємодії візуалізується – робиться видимим. Наявність смуг на певних ділянках стрипу підтверджує присутність у дослідженій сироватці антитіл до певних антигенів ВІЛ.

Імунний блот часто найчастіше використовують для підтвердження діагнозу ВІЛ-інфекції. ВООЗ вважає позитивними сироватки, в яких методом імунного блотингу виявляються антитіла до двох білків оболонки ВІЛ. Згідно з цими рекомендаціями, за наявності реакції тільки з одним з білків оболонки (gp160, gp120 , gp41) у поєднанні або без реакції з іншими білками, результат вважається сумнівним і рекомендується повторне дослідження з використанням набору іншої серії або іншої фірми. Якщо і після цього результат залишається сумнівним, дослідження продовжуються кожні 3 місяці.

Для проведення імуноблотингу на першому етапі білки, що містяться в сироватці крові, поділяють у гелі за їхньою молекулярною масою та зарядом за допомогою електричного поля (методом електрофорезу в гелі). Потім на гель накладають нітроцелюлозну або нейлонову мембрану і промокають (це і є блот). Це здійснюють у спеціальній камері, яка дозволяє здійснити повний пернос матеріалу з гелу на мембрану. В результаті та картина розташування білків, що була на гелі, відтворюється на мембрані (блот), з якої можна далі легко маніпулювати. Спочатку мембрану обробляють антитілами до шуканого антигену, а після відмивання незв’язаного матеріалу додають радіоактивно мічений коньюгат, який специфічно зв’язується з антитілами (як в ІФА). Розташування комплексу, що утворюється, антиген – антитіло – мічений коньюгат визначають за допомогою авторадіографії з використанням рентгенівської плівки. Після її прояву все стає ясним, чи є антигени в крові, чи їх немає.

Імунний блот (імуноблот, Western Blot, вестерн-блот)
– поєднує в собі імуноферментний аналіз (ІФА) з попереднім електрофоретичним перенесенням на нітроцелюлозну смужку (стрип) антигенів вірусу.

У цьому красивому вченому назві «blot» перекладається швидше за все як «ляпка», а «western» – як «західна» відображає напрямок поширення цієї «клакси» по паперу зліва направо, тобто на географічній карті це відповідає напряму із заходу на схід. ». Суть методу «імунний блот» полягає в тому, що імуноферментну реакцію проводять не з сумішшю антигенів, а з антигенами ВІЛ, попередньо розподіленими методом імунофорезу за фракціями, що розташовуються відповідно до молекулярної ваги поверхнею нітроцелюлозної мембрани. В результаті основні білки ВІЛ, носії антигенних детермінантів, розподіляються по поверхні у вигляді окремих смуг, які виявляються при проведенні імуноферментної реакції.

Імуноблот включає кілька стадій:

Підготовка стрипа.
Попередньо очищений і зруйнований до складових компонентів вірус імунодефіциту (ВІЛ) піддається електрофорезу, при цьому антигени, що входять до складу ВІЛ, поділяються за молекулярною вагою. Потім методом блоттингу (аналог видавлювання на “промокашку” надлишку чорнила) антигени переносять на смужку нітроцелюлози, яка відтепер містить невидимий поки що оком спектр антигенних смуг, характерний для ВІЛ.

Вивчення проби.
На нітроцелюлозну смужку наноситься досліджуваний матеріал (сироватка, плазма крові пацієнта тощо), і якщо в пробі є специфічні антитіла, то вони зв’язуються з відповідними їм (компліментарними) антигенними смугами. Через війну наступних маніпуляцій результат цієї взаємодії візуалізується – робиться видимим.

Трактування результату.
Наявність смуг на певних ділянках нітроцелюлозної пластини підтверджує присутність у дослідженій сироватці антитіл до строго певних антигенів ВІЛ.

Полоска А – Позитивний контроль

Смужка В – Слабопозитивний контроль

Смужка С – Негативний контроль

Смужка D – Позитивний зразок (виявлено присутність антитіл до ВІЛ-1)

В даний час імунний блот (імуноблот) є основним методом для підтвердження наявності вірусспецифічних антитіл у досліджуваній сироватці. У деяких випадках ВІЛ-інфекції, до розвитку сероконверсії, специфічні антитіла більш ефективно виявляються методом імунного блот, ніж ІФА. При дослідженні методом імунного блоттингу виявлено, що найчастіше у сироватках хворих на СНІД виявляються антитіла до gp 41, причому виявлення р24 у осіб, які обстежуються з профілактичною метою, потребує додаткових досліджень на наявність у них ВІЛ-інфекції. Тест-системи для імунного блоттингу на основі рекомбінантних білків, отриманих шляхом генної інженерії, виявилися специфічнішими, ніж звичайні системи на основі очищеного вірусного лізату. При використанні рекомбінантного антигену формується не дифузна, а чітко виражена вузька смужка антигену, легко доступна для обліку та оцінки.

Сироватки осіб, інфікованих ВІЛ-1, виявляють антитіла до наступних основних білків та глікопротеїдів – структурних білків оболонки (env) – gp160, gp120, gp41; ядра (gag) – p17, p24, p55, і навіть ферментів вірусу (pol) – p31, p51, p66. Для ВІЛ-2 типові антитіла до env – gp140, gp105, gp36; gag – p16, p25, p56; pol – p68.

Серед лабораторних методів , необхідних для встановлення специфічності реакції, найбільше визнання має виявлення антитіл до білків оболонки ВІЛ-1-gp41, gp120, gp160, та ВІЛ-2 – gp36, gp105, gp140.

ВООЗ вважає позитивними сироватки, в яких методом імунного блотингу виявляються антитіла до будь-яких двох глікопротеїдів ВІЛ. Згідно з цими рекомендаціями, за наявності реакції тільки з одним з білків оболонки (гп 160, гп 120, гп 41) у поєднанні або без реакції з іншими білками, результат вважається сумнівним і рекомендується повторне дослідження, використовуючи набір іншої серії або іншої фірми. Якщо після цього результат залишається сумнівним, рекомендується спостереження протягом 6 місяців (дослідження через 3 місяці).

Наявність позитивної реакції з антигеном p24 може вказувати на період сероконверсії, оскільки антитіла саме цього білка іноді з’являються першими. У цьому випадку рекомендується, залежно від клінічних та епідеміологічних даних, повторити дослідження із зразком сироватки, взятим як мінімум через 2 тижні, і це є саме тим випадком, коли при ВІЛ-інфекції необхідне дослідження парних сироваток.

Позитивні реакції з білками gag та pol без наявності реакції з білками env можуть відображати стадію ранньої сероконверсії, а також може вказувати на ВІЛ-2-інфекцію або на неспецифічну реакцію. Особ з такими результатами після тестування на ВІЛ-2 повторно досліджують через 3 місяці (протягом 6 місяців).

Імуноблот на ВІЛ дозволяє виявити антитіла до вірусних білків, поміщених на спеціальну нітроцелюлозну мембрану. Це високоточне дослідження, що встановлює наявність фракцій, у яких основні білки розташовуються як невеликих смуг.

Оболонка вірусу ВІЛ-1 містить глікопротеїни з молекулярною масою від 41 кд до 160 кд (кілодальтон). Велике значення для імунного блоттингу має глікопротеїн ВІЛ-2 з молекулярною вагою від 32 кд до 140 кд.
Білки серцевини ВІЛ-1 та ферменти вірусу представлені протеїнами Р17, Р24, Р55.

Збудник ВІЛ-2 складається з білків, що позначаються як Р16, Р25, Р56. Вони утворюють його внутрішню оболонку. До складу геному входять 6 регуляторних та 3 структурних гени. Нерідко при розподілі клітин виникають генетичні неточності та з’являється кілька підтипів збудника.

Позитивні проби

Для уникнення помилок при лабораторній діагностиці ВІЛ-інфекції пацієнту призначають додаткове дослідження. Його результати інтегруються як позитивні, якщо виявлені антитіла до 2 або 3 білків ВІЛ-1 або ВІЛ-2.

Імуноблот підтверджує всі добрі результати ІФА. У цьому випадку виявляють антитіла gp120/160, gp41 або р24, які є структурними одиницями трьох основних генів СНІДу – gag, pol, and env. У деяких пацієнтів, які мають негативні результати ІФА та ПЛР, імуноблот показує кілька позитивних смужок. Лікар призначає додаткове дослідження р24 для встановлення правильного діагнозу та виключення ранньої фази ВІЛ-інфекції.

Якщо отримані результати ставляться під сумнів, хворому пропонують повторювати здачу аналізу протягом наступних 3 місяців. Майже всі випадки захворювання на ВІЛ підтверджують за допомогою системи для проведення імуноблоту — приладу Sanofi. Найчастіше виявляють антигени ВІЛ, білки р25, gp110/120 і gp160, що вказують на інфікування вірусом. Хибнопозитивна проба реєструється у пацієнтів, які страждають на захворювання сполучної тканини , що мають підвищений рівень білірубіну, при взаємодії з різними вірусними антигенами.

Негативний результат

У разі нестачі позитивних ліній, що відповідають білкам вірусу СНІДу, імуноблот розшифровують як негативний результат. Аналіз однозначно підтверджує відсутність зараження вірусом імунодефіциту або вказує на період вікна. Якщо імуноблот дає негативний результат, то людина не є носієм вірусу СНІДу.

Для дослідження беруть зразки сироватки ВІЛ-інфікованих пацієнтів. Їх зберігають у замороженому вигляді за температури -20°С. Аналіз проводять за допомогою тест-систем:

Реєстрація негативного результату вказує на відсутність у сироватці антитіл до оболонкових глікопротеїнів ВІЛ gp120, gp160, Sp41.

Нерідко хворого цікавить питання, чи негативний результат імуноблоту на ВІЛ у пацієнта, який має інфікованого сексуального партнера. Після проведеного дослідження нерідко отримують сумнівний результат або фіксуються антитіла до білків GP120 і GP160, що вказує на повну відсутність негативних даних. Іноді сумнівну відповідь реєструють у пацієнтів з інфекцією, що безсимптомно протікає.

Неінтерпретовані результати

Аналіз, проведений за допомогою різних тестів на антитіла до ВІЛ-інфекції, іноді не відповідає негативним даним та не відповідає критеріям серопозитивності. Лікареві важко встановити причину появи сумнівного результату.

Деякі хворі не входять до групи ризику інфікування ВІЛ. Лікар може помилятися в інтерпретації результатів дослідження у разі, якщо інфікування викликано іншим серотипом.

Сироватку крові пацієнта слід досліджувати у динаміці. Якщо протягом 6 місяців не спостерігають клінічних проявів СНІДу та відсутні фактори ризику, у хворого реєструють відсутність інфекції.

Сумнівні результати аналізу отримують у пацієнтів з низьким ризиком інфікування. У деяких випадках поява неясних даних викликають імунні комплекси і аутоантитіла, що містяться в сироватці крові.

У деяких хворих виникнення сумнівних результатів спричинене розвитком патологічних процесів:

У хворого з’являються зміни у клінічному аналізі крові, спостерігають зростання С-реактивного білка або підвищення ШОЕ . У людей, які страждають на інфекційні захворювання, часто виявляють сумнівну реакцію імуноблоту на ВІЛ.

Пацієнти з невизначеними результатами не можуть бути донорами крові та біологічних матеріалів.

Лінійний метод

Принцип імуноблотінгу включає:

1. Використання нативної вірусної речовини ВІЛ-формат або антигенів у форматі Western-Blot.
2. Поєднання білків ВІЛ з окремими антитілами, виявленими у сироватці крові.
3. Процес інкубації, що відбувається з додаванням мічених антитіл до людського Ig.
4. Розшифрування пофарбованих смуг.

Аналіз дозволяє лікареві своєчасно провести інтерпретацію результатів дослідження. Позитивний блот розшифровують як 2ENV+/-GAG+/POL, невизначений – 1ENV+/-GAG+/POL. Негативний результат передбачає відсутність смуг.

Для виконання аналізу застосовують рекомбінантний та лізатний імуноблот. Дослідження є специфічним та становить 99,5%.

Чи може результат аналізу бути розшифрований як хибний, цікавляться хворі. Отримані дані можуть бути сформовані внаслідок стимуляції захисних сил організму (вагітності, гемодіалізу). При підозрі на гострий ретровірусний синдром та контакт із хворим на ВІЛ-інфекцію пацієнту рекомендують здати сироватку на реакцію ПЛР. Повторне серологічне дослідження підтверджується шляхом вимірювання вірусного навантаження у представленому образі біологічного матеріалу.

Діагностика ВІЛ у новонароджених

Аналіз на СНІД у дитини раннього віку проводять у тому випадку, якщо встановлено контакт із ВІЛ-інфікованою матір’ю. Серологічні реакції можуть бути позитивними протягом 15 років. Антитіла у сироватці крові новонародженого виявляють за допомогою реакцій ІФА, РІФ та імунного блоттингу.

Протягом 9 місяців життя дитини позитивний результат у зв’язку з наявністю в сироватці крові антитіл матері. Антиген Р24 має специфічність близько 65%. У деяких випадках не вдається виявити антитіла у хворої дитини, якщо у неї діагностовано вроджений низький вміст глобулінів у крові. Встановлений негативний результат імуноблоту не гарантує відсутність інфекції.

Тестування проводять у кілька етапів:

Подальше вивчення антитіл проводять доти, доки не будуть отримані 2 негативні результати імуноблоту. Встановлення діагнозу СНІД у дитини, народженої від ВІЛ-інфікованої жінки, можливе на підставі 2 позитивних результатів реакції ПЛР. Передача новонародженому збуднику ВІЛ-інфекції виключена, якщо жінка не годує дитину грудьми.

Дослідження під час вагітності

Майбутній матері призначають імунний та лінійний блот, якщо отримано позитивний результат на ВІЛ методом ІФА. Якщо блот підтверджений, пацієнтка хвора на СНІД. У цьому випадку починаючи з 14 тижнів вагітності призначають терапію, що попереджає інфікування дитини.

Чи може помилитися фахівець при виконанні дослідження сироватки крові під час вагітності, запитують пацієнтки у лікаря. Він повинен видати на руки вагітній жінці копії аналізів ПЛР, ІФА для усунення сумнівів у їхній достовірності.

При постановці імуноблоту іноді виникають проблеми, але якщо ІФА, блот та ПЛР – позитивні, діагноз ВІЛ-інфекції підтверджується остаточно. Імовірність отримання неправдивого аналізу при вагітності велика. Якщо ІФА (+), а імуноблот (-), жінці пропонують перездати сироватку крові.

В обмінній карті вагітної вказують результат дослідження. За його позитивного значення жінці забороняють годувати дитину після пологів, ніж заразити вірусом СНІДу. Остаточні висновки роблять на підставі лабораторних, клінічних та епідеміологічних досліджень. Тільки після їхнього розшифровки хворому ставлять діагноз «ВІЛ-інфекція».

альна гіпотензія, тахікардія, задишка, ціаноз. При тяжкому перебігу хвороби можливі кровотеча, блювання з домішкою крові. Печінка та селезінка збільшені. Відзначають олігурію. Температура залишається постійно високою протягом 3-10 днів. У периферичній крові – нейтрофільний лейкоцитоз зі зсувом формули вліво. Крім описаних загальних проявів чуми, розвиваються ураження, характерні окремих клінічних форм хвороби.

Шкірна форма
зустрічається рідко (3-5%). На місці вхідних воріт інфекції з’являється пляма, потім папула, везикула (фліктена), заповнена серозногеморагічним вмістом, оточена інфільтрованою зоною з гіперемією та набряком. Фліктен відрізняється різкою хворобливістю. При розтині її утворюється виразка з темним струпом дні. Чумна виразка відрізняється тривалою течією, гоїться повільно, утворюючи рубець. Якщо ця форма ускладнюється септицемією, виникають вторинні пустули та виразки. Можливий розвиток регіонарного бубона (шкірно-бубонна форма).

Бубонна форма
зустрічається найчастіше (близько 80%) та відрізняється відносною доброякісністю течії. З перших днів хвороби в області регіонарних лімфатичних вузлів з’являється різка болючість, що ускладнює рухи та змушує хворого приймати вимушене становище. Первинний бубон, як правило, буває поодиноким, рідше спостерігаються множинні бубони. Найчастіше уражаються пахові і стегнові, трохи рідше пахвові і шийні лімфатичні вузли . Розміри бубона варіюють від волоського горіха до яблука середніх розмірів. Яскраві особливості – різка болючість, щільна консистенція, спаяність з тканинами, що підлягають, згладженість контурів через розвиток періаденіту. Бубон починає формуватися другого дня хвороби. У міру розвитку шкіра над ним червоніє, блищить, часто має ціанотичний відтінок. Спочатку він щільний, потім відбувається його розм’якшення, утворюється флюктуація, контури стають нечіткими. На 10-12-й день хвороби він розкривається – утворюється свищ, виразка. При доброякісному перебігу хвороби та сучасної антибіотикотерапії спостерігають його розсмоктування чи склерозування. В результаті гематогенного занесення збудника можуть формуватися вторинні бубони, які з’являються пізніше і відрізняються незначними розмірами, меншою хворобливістю і, як правило, не нагноюються. Грізним ускладненням цієї форми може бути розвиток вторинної легеневої або вторинної септичної форми, що різко погіршує стан хворого, аж до смерті.

Первинно-легенева
форма
зустрічається рідко, у періоди епідемій у 5–10% випадків і є найбільш небезпечною в епідеміологічному відношенні та тяжкою клінічною формою хвороби. Починається вона гостро, бурхливо. На тлі різко вираженого інтоксикаційного синдрому з перших днів з’являються сухий кашель, сильна задишка, ріжучий біль у грудях. Кашель потім стає продуктивним, із виділенням мокротиння, кількість якої може варіювати від кількох плювків до величезних кількостей, вона рідко відсутня взагалі. Мокрота, спочатку піниста, склоподібна, прозора, потім набуває кров’янистого вигляду , потім стає чисто кривавою, містить безліч чумних бактерій. Зазвичай вона буває рідкої консистенції – одна з діагностичних ознак . Фізикальні дані мізерні: невелике вкорочення перкуторного звуку над ураженою часткою, при аускультації нерясні хрипи, що явно не відповідає загальному тяжкому стану хворого. Термінальний період характеризується наростанням задишки, ціанозу, розвитком сопору, набряку легенів та ІТШ. АТ падає, пульс частішає і стає ниткоподібним, тони серця глухими, гіпертермія змінюється гіпотермією. За відсутності лікування захворювання протягом 2-6 діб закінчується летально. При ранньому застосуванні антибіотиків перебіг хвороби доброякісний, мало відрізняється.

Скільки робиться аналіз на гепатит: призначення, види дослідження, терміни виконання, розшифровка результатів, терміни придатності аналізу

Запальні процеси в печінці, які спровоковані різними токсинами і вірусами, що потрапили в організм, ведуть до патологічних станів, що отримали назву гепатити. Наслідки їх досить серйозні – це цироз, онкологія, недостатність печінки. Раннє виявлення хвороби надає шанс на успішне лікування. Важливо пам ‘ятати, що тривалий період захворювання часто протікає безсимптомно. Дослідження на гепатит – це перший етап на шляху комплексного обстеження. Які існують методи, і скільки часу робиться аналіз крові на гепатит буде розглянуто в цій статті.

• Як перевіритися на гепатит?
• Неспецифічні аналізи на гепатит
• Специфічні аналізи на гепатит
• Маркери гепатиту B
• Аналіз на гепатит C
• ПЛР у діагностиці запалення печінки
• Види аналізів на сифіліс
• Скільки часу робиться аналіз на гепатит і коли слід повторити дослідження?
• Де здати і скільки робляться аналізи на ВІЛ і гепатит?
• Профілактика
• Види аналізів на ВІЛ
• Ув ‘язнення

Як перевіритися на гепатит?

Існує кілька видів досліджень, для проведення яких в якості біоматеріалу використовують кров Севастополя:

Перші два способи використовуються для диференційної діагностики, їх називають специфічними, а за допомогою трьох останніх підтверджують виставлений діагноз, вони є допоміжними. Крім перерахованих вище методів, перевіритися можна і в домашніх умовах.

Для цього існують експрес-тести, за допомогою яких також роблять аналіз на гепатит. Через скільки хвилин будуть готові результати при такому виді дослідження? Результат оцінюють через той проміжок часу, який вказано в інструкції до тесту. Якщо в якості біоматеріалу була використана капілярна кров, то підсумки будуть готові через десять хвилин, якщо слина – через двадцять. Слід пам ‘ятати, що експрес-метод не можна вважати остаточним підтвердженням захворювання.

Неспецифічні аналізи на гепатит

Деякі пацієнти цікавляться, а навіщо їм призначили аналіз урини, якщо необхідно перевіритися на гепатит і скільки робиться аналіз? Справа в тому, що розвиток цього захворювання супроводжується жовтяницею, а одним з її проявів є темний колір сечі. Причина цього явища – підвищена концентрація білірубіну в крові і, як наслідок, присутність в урині продуктів його розщеплення. Аналіз буде готовий на другий день. Наступний вид досліджень – це загальний і біохімія крові. У першому виявляється досить низький рівень білих кров ‘яних тілець і гемоглобіну. А зниження концентрації тромбоцитів свідчить про важку форму хвороби. Другий вид, хоча і не є специфічним, однак, він досить інформативний. Спостерігається завищення допустимих норм таких показників:

Вони вказують на вираженість руйнівних процесів, які протікають у клітинах печінки і, як підсумок, ферментні речовини потрапляють у кров ‘яне русло. Крім того, кількісні зміни присутні серед тригліцеридів і білкових фракцій. Якщо у письменника відсутнє захворювання печінки, то аналіз не виявить жодних змін.

Оцінити стан згортаючої системи крові допоможе коагулограма. Через порушення функцій печінки та білкової недостатності наявність факторів згортання різко знижується, що може спровокувати найсильніші кровотечі.

Специфічні аналізи на гепатит

До них належать імунологічні та серологічні. З їх допомогою виявляють антитіла до збудників і частинки вірусу в крові ідида. Антитіла – це білкові сполуки, які виробляються білими кров ‘яними тільцями. За результатами цих досліджень проводять диференціальну діагностику і визначають вид гепатиту, кожен з яких має свій характерний маркер. Наприклад, перевіритися на гепатит A цілком доступно в домашніх умовах. Для цього купують в аптечному закладі експрес-тести. Скільки робиться аналіз на маркери гепатиту A залежить від фірми виробника цих медичних виробів. У середньому тривалість дослідження займає не більше п ‘ятнадцяти хвилин. Безумовно, аналіз, проведений в домашніх умовах, не може служити підставою для постановки діагнозу, але, як первинне обстеження він цілком виправданий. Лабораторії надають великий перелік послуг з діагностики гепатиту, використовуючи такі методи:

• Імуноферментний. Використовуючи його, визначають вірусне навантаження. IgM – це специфічний маркер, який виявляється в перші дні зараження. У відповідь на потрапляння в організм збудника захворювання синтезуються антитіла. Виявлення IgG свідчить про перенесену інфекцію та наявність імунітету проти вірусу.
• Полімеразна ланцюгова реакція використовується для ранньої діагностики захворювання і вважається ефективним методом. Його застосовують для виявлення інфікованих осіб, які перебували з хворими в контакті. Скільки робиться аналіз крові на гепатит цим способом залежить від того, в лабораторії якого закладу охорони здоров ‘я здавали біоматеріал. Приватні клініки готові надати відповіді через один-три дні, в обласних і муніципальних це дослідження займає до семи днів.

Маркери гепатиту B

Діагностичні маркери цього виду гепатиту:

• Анти-HBe – свідчить про ремісію або одужання.
• Анти-HBcorIgG – вказує на успішну вакцинацію і перенесену хворобу.
• HBsAg – виявляється в кінці інкубаційного періоду. Збереження його протягом шести місяців від початку захворювання говорить про хронічну стадію.
• HBeAg – вказує на наявність в організмі вірусу. Коли проходить жовтяниця маркер не виявляється. Хронічний перебіг підозрюють при тривалому його збереженні в крові.
• Анти-HBs – реєструються при одужанні. Цей показник відповідальний за силу імунної відповіді.
• Анти-HBcorIgM – свідчить про гостре вірусне запалення печінки. Ці антитіла знаходяться в кров ‘яному руслі до повного одужання Севастополя.

Скільки робиться аналіз на гепатит B? Зазвичай, відповідь пацієнт отримує протягом семи днів.

Аналіз на гепатит C

Кров досліджують імуноферментним методом (ІФА) на наявність антитіл до HCV. Антитіла являють собою білкові сполуки, які синтезуються імунною системою, як відповідна реакція на проникнення вірусу в організм. Вони бувають різних класів і виявлятися можуть тривалий період, навіть довічно, і при відсутності збудника захворювання. ІФА використовують для первинної діагностики захворювання. Його обов ‘язково призначають перед хірургічним втручанням, донорам, жінкам у становищі тощо.

Скільки робиться аналіз на гепатит С? Термін становить від одного до п ‘яти днів, залежно від завантаженості лабораторії. При отриманні позитивного результату проводять ще допоміжний тест, який називається імуноблотинг. Для підтвердження діагнозу застосовують ПЛР, виявляючи цим методом РНК вірус. Здебільшого присутність у крові антитіл HCV свідчить про наявність у язика хронічного вірусного гепатиту. У деяких випадках можливі ложноположні результати. Часто таке явище зустрічається у індивідів, які мають деякі інфекційні захворювання, і у вагітних жінок. Причина криється в прийомі імунодепресантів і дисбалансу в роботі імунної системи.

Скільки днів робиться аналіз на гепатит? Таке питання досить часто ставлять пацієнти лікарю при призначенні цього виду досліджень. В основному підсумки готові на наступний день, проте в деяких випадках їх можна отримати через п ‘ять або десять днів.

ПЛР у діагностиці запалення печінки

Дослідження методом полімеразної ланцюгової реакції роблять після виявлення в організмі оріду антитіл. Він вважається найбільш достовірним. Виявляють вірусну РНК або ДНК за допомогою ПЛР. Крім того, проводячи таке дослідження визначають генотип вірусу, що дуже важливо для призначення терапевтичного лікування та контролю за реакцією організму на прийом певних медикаментів. Виділяють кілька варіантів цього виду діагностики:

• Якісний – вказує на присутність в організмі збудника захворювання, тобто застосовується для підтвердження хвороби. Цей вид дає можливість дізнатися синтезує організм спеціальні клітини для боротьби з інфекцією чи ні.
• Кількісний – дозволяє в кількісному вираженні виявити наявність вірусу, а також уточнити ступінь інфікування. Він показує вірусне навантаження на організм, воно може бути високим або низьким.

Скільки робиться аналіз ПЛР на гепатит? Готовий результат видається пацієнту не пізніше чотирнадцяти днів після здачі біоматеріалу. А в деяких випадках і протягом п ‘яти годин. Вивчивши підсумки аналізу, доктор визначає тактику лікування, мета якого зниження вірусного навантаження.

Види аналізів на сифіліс

Цей вид дослідження часто призначають разом з аналізом на гепатит. Існує кілька способів виявлення сифілісу, в тому числі і в домашніх умовах. Експрес-тести доступні для проведення дослідження вдома. Результат буде готовий не пізніше, ніж через 30 хвилин. Лабораторні методи:

• Імунної флюорисценції – це найбільш точний спосіб виявлення інфекції.
• Імуноферментний – дозволяє визначити різних класів антитіла в якісному і кількісному вираженні.
• Іммобілізації трепонем – один з найбільш чутливих способів виявлення певних трепонем. З його допомогою діагностують інфекцію за відсутності ознак захворювання.
• Пасивної агглютинації – спосіб результативний на будь-якій стадії патології за винятком перших чотирьох тижнів проникнення збудника.

Незалежно від того, яким способом було проведено дослідження, підсумки можна отримати через два-три дні, а термін придатності аналізів на сифіліс від трьох місяців до року.

Скільки часу робиться аналіз на гепатит і коли слід повторити дослідження?

Багато пацієнтів задаються цими питаннями. Всі аналізи мають різні терміни придатності:

• клінічні аналізи крові – п ‘ять днів;
• біохімія – не більше двох тижнів;
• обстеження крові на гепатит B і C, ІФА, ПЛР – шість місяців.

Якщо пацієнт регулярно відвідує лікаря, то йому не варто турбуватися про те, коли здавати аналіз. Лікар контролює це питання. Аналізи на ВІЛ і гепатит обов ‘язково здають пацієнти перед госпіталізацією в стаціонар, при вагітності, перед хірургічною операцією, перед тим, як здати донорську кров. Скільки робиться аналіз на гепатит? Цим питанням часто цікавляться пацієнти у доктора. Проміжки часу, через які аналізи будуть готові, також різні. При проведенні дослідження експрес-тестом відповідь буде готовий максимум через шістдесят хвилин, а мінімум – через п ‘ятнадцять хвилин. Аналіз на антитіла робиться від одного до семи днів, ПЛР буде готовий протягом двох тижнів. У кожному конкретному випадку терміни готовності краще уточнити у лікаря.

Де здати і скільки робляться аналізи на ВІЛ і гепатит?

Ці питання цікавлять багатьох. В першу чергу слід звернутися до поліклініки за місцем проживання, в якій після невеликого обстеження доктор дасть направлення для проходження цих видів дослідження, розповість, як правильно підготуватися до здачі біоматеріалу і де найкраще здавати аналіз. Важливо пам ‘ятати, що дослідження на ВІЛ можна пройти анонімно, як у бюджетній, так і в приватній медичній організації. Скільки робляться аналізи на ВІЛ і гепатит і скільки часу вони дійсні? Результати будуть готові через чотири-сім днів, а дійсні вони всього шість місяців. Для виявлення гепатиту призначають загальний аналіз урини і крові, біохімію крові, а також роблять специфічну діагностику. Для діагностики ВІЛ-інфекції проводять комплекс обстежень, що включає в себе ІФА та імуноблот.

Профілактика

Гепатит належить до епідемічних захворювань, за твердженням ВООЗ. Парентеральний шлях передачі викликає інфекційне ураження печінки, і за короткий проміжок часу гостра стадія переходить в хронічну. Вірусний гепатит B і C провокує розвиток печінкової недостатності, портальної гіпертензії, цирозу. Вилікувати це захворювання дуже складно, тому слід направити всі сили на попереджувальні заходи. Виділяють профілактику:

• Первинну – вона спрямована на недопущення зараження. З огляду на те, що ці види хвороби передаються при статевому контакті і через кров, треба дотримуватися певних правил при виконанні лікувальних маніпуляцій. Не користуватися чужими засобами гігієни, використовувати засоби захисту при статевій близькості. Вакцинація належить до специфічної профілактики і є хорошим способом захисту від цієї недуги. Графік щеплень узгоджується з лікуючим лікарем.
• Вторинну – заходи спрямовані на лікування та раннє виявлення інфікованих індивідів. Жінкам, які планують народження малюка, рекомендується попередньо здати аналіз крові на гепатит. Скільки днів робиться дослідження можна уточнити у лікаря. Такий підхід допомагає виявити, чи є жінка носієм інфекції, і відповідно знизити ризик її передачі майбутній дитині. Для інфікованих індивідів показано: консультування; постійне моніторування з метою раннього діагностування хронічної патології; проведення відповідної терапії, в тому числі й антивірусної.

Види аналізів на ВІЛ

Ви вже знаєте скільки робиться аналіз на сифіліс і гепатит. ВІЛ виявити також можна, пройшовши діагностику. Розглянемо які існують методи:

• ПЛР – з його допомогою досліджують імунний статус, визначають РНК і ДНК віруси. Триває цей процес від трьох до чотирнадцяти днів.
• Експрес-тести – для аналізу потрібна будь-яка біологічна рідина (кров, слина, урина). Результат готовий протягом 15-30 хвилин.
• ІФА – підсумки імуноферментного аналізу будуть готові через дві доби.
• Імуноблот – у сироватці крові шукають певні антигени ВІЛ. Триває ця процедура кілька днів.
• Загальний аналіз крові (ОАК) – відповідь готова зазвичай наступного дня.

В основному, терміни готовності результатів залежать від завантаженості лабораторій. Тому питання про те, скільки робляться аналізи на ВІЛ (СНІД) і гепатит, краще обмовити заздалегідь, оскільки в деяких ситуаціях відповідь потрібна якомога швидше. Наприклад, у звичайних державних поліклініках за відповіддю запрошують через два тижні. При зверненні до приватних центрів – через тиждень.

Скільки часу буде дійсний результат залежить від мети, яку переслідував лікар, призначаючи аналіз. Наприклад, підсумки дослідження на гепатит і ВІЛ, здані для проведення оперативного втручання, придатні протягом трьох місяців, ОАК – не більше десяти днів. Загальновизнаним терміном дії дослідження на гепатит і ВІЛ вважається шість місяців. Однак, для вагітних жінок він не актуальний, їм слід частіше здавати аналізи. Важливо пам ‘ятати, що після часу інформація стає неактуальною, тобто спотворюється. Тому витримування термінів їх дії – це гарантія своєчасно діагностованого захворювання та лікування.

Ув ‘язнення

Скільки робиться аналіз крові на гепатит слід уточнити у лікаря. Проводять його у разі підозри на патологію або з профілактичною метою для виявлення факторів ризику. Насамперед призначають біохімію крові і оцінюють концентрацію білків і ферментів, виявляючи таким чином патологічні процеси, що відбуваються в печінці. Цей вид аналізу доступний у будь-якому медичному закладі. Специфічні тести проводять у спеціалізованих лабораторіях.

Скільки робиться аналіз на гепатит? Якщо хворий перебуває на стаціонарному лікуванні результати будуть відомі в день здачі або протягом десяти днів, у разі їх відправки в іншу лабораторію. При необхідності доктор порекомендує повторне дослідження. Наприклад, антитіла проти гепатиту C протягом чотирьох – десяти тижнів можуть бути відсутні в кров ‘яному руслі. Важливо пам ‘ятати, що аналіз крові не визначить гострий або хронічний характер носить захворювання, з його допомогою виявляють тільки тип гепатиту.